ИГФ-1 ЛР3 лиофилизован,The freeze-dried long-acting insulin-like growth factor-1 LR3 formulation uses low-temperature vacuum drying technology to remove moisture, preventing peptide degradation or aggregation in liquid formulations and extending the shelf life (usually up to 2 years at -20 ℃). It can be directly used after reconstitution, reducing transportation and storage costs. At the same time, the freeze-drying process can remove impurities and improve the purity of the formulation (usually>95%). Међутим,-дуготрајна употреба може довести до десензибилизације рецептора и захтевати повремену примену. Високе дозе могу изазвати хипогликемију, а ниво глукозе у крви треба пратити.
Не пружамо само чист прах и капсуле, већ и друге дозне облике. Ако је потребно, контактирајте наш продајни тим.
Наши производи из
ИГФ-1 ЛР3 ЦОА
Клонирање гена и конструкција вектора експресије
Дизајн гена заИГФ-1 ЛР3 лиофилизованзаснива се на секвенци природног ИГФ-1, али са следећим кључним модификацијама:
Проширење Н-терминала: Додајте 13 аминокиселина (МФПАМПЛССЛФФН) на Н-крај ИГФ-1 да бисте продужили његов полуживот и побољшали његову биолошку активност.
Замена амино киселина: Замените глутаминску киселину (Глу) на позицији 3 ИГФ-1 са аргинином (Арг), тј. Р3 модификацијом, да бисте смањили способност везивања са ИГФБП и повећали слободну концентрацију.
синтеза гена
Добијте фрагмент циљног гена путем хемијске синтезе или ПЦР амплификације на основу дизајниране секвенце гена ИГФ-1 ЛР3. Хемијска синтеза обично усваја технологију синтезе у чврстој фази, постепено додајући нуклеотиде и на крају синтетизујући комплетне фрагменте гена. ПЦР амплификација користи познате секвенце ИГФ-1 за дизајнирање прајмера и амплификацију циљног гена путем ПЦР реакције.
Избор одговарајућег експресионог вектора је кључни корак у експресији протеина. Уобичајено коришћени експресиони вектори укључују пЕТ серије (као што је пЕТ30а), пГЕКС серију, итд. Ови вектори имају ефикасне промотере, вишеструка места клонирања и секвенце ознака (као што су Хис ознаке), које олакшавају накнадно пречишћавање и детекцију протеина.
На пример, кораци конструкције вектора експресије пЕТ30а су следећи:
Ензимско цепање: Користите рестрикционе ендонуклеазе као што су БамХИ и КсхоИ да извршите двоструко цепање ензима на пЕТ32а вектору и фрагменту гена ИГФ-1 ЛР3, производећи комплементарне лепљиве крајеве.
Веза: Вектор дигестиран ензимом и фрагмент гена су повезани Т4 ДНК лигазом да формирају рекомбинантни експресиони вектор пЕТ32а-ЛР3-ИГФ1.
Трансформација: Трансформишите рекомбинантни експресиони вектор у компетентне ћелије Е. цоли (као што је ДХ5) и добијте позитивне клонове кроз скрининг антибиотика (као што је ампицилин).
Идентификација: Потврдите исправност рекомбинантног експресионог вектора помоћу метода као што су ПЦР колонија, идентификација дигестије ензима или секвенцирање.
Експресија протеина
Избор сојева експресије
Избор одговарајућег соја за експресију је кључан за експресију протеина. Често коришћени експресиони сојеви укључују Росетта (ДЕ3), БЛ21 (ДЕ3) итд. Ови сојеви имају ефикасне Т7 РНК полимеразне системе и могу ефикасно да експримирају гене које покреће Т7 промотер.
Узимајући Росетту (ДЕ3) као пример, њене карактеристике укључују: садржи ген Т7 РНК полимеразе, изазван експресијом ИПТГ. Ношење гена тРНК ретких кодона може ефикасно експримирати егзогене гене који садрже ретке кодоне. Погодно за експресију токсичних протеина или тешко експресних протеина.
Оптимизација услова експресије
Услови експресије протеина, као што су концентрација индуктора, температура индукције, време индукције итд., имају значајан утицај на принос и квалитет протеина. Оптимизацијом услова експресије, ниво експресије ИГФ-1 ЛР3 се може повећати.
Концентрација индукционог агенса: ИПТГ је уобичајено коришћено индукционо средство, са концентрацијом типично између 0,1-1 мМ. Одредите оптималну концентрацију ИПТГ кроз експерименте са градијентом да бисте постигли највиши ниво експресије протеина.
Температура индукције: Температура индукције се обично бира између 16-37 степени. Ниже температуре (као што је 16-20 степени) могу помоћи у смањењу деградације протеина и формирању инклузијских тела, и повећати принос растворљивих протеина.
Време индукције: Време индукције је обично између 2-24 сата, а оптимално време индукције се одређује анализом нивоа експресије протеина кроз временско узимање узорака.
Детекција експресије протеина
Израз наИГФ-1 ЛР3 лиофилизованје откривен СДС-ПАГЕ и Вестерн блот методама.
СДС-ПАГЕ: Сакупите узорке бактерија пре и после индукције, извршите ултразвучну фрагментацију или хемијску лизу, центрифугирајте да бисте одвојили супернатант и талог и извршите СДС-ПАГЕ анализу засебно. Поређењем промена протеинских трака у супернатанту и талогу пре и после индукције, потврђена је експресија ИГФ-1 ЛР3.
Вестерн блот: Користите специфична антитела (као што су антитела на Хис таг или анти ИГФ-1 антитела) да бисте извршили имуноблот анализу на СДС-ПАГЕ одвојеним протеинима да бисте додатно потврдили експресију и молекулску тежину ИГФ-1 ЛР3.
Протеин Пурифицатион
Бактеријска лиза
Сакупите индуковане бактеријске ћелије и лизирајте их да бисте ослободили интрацелуларне протеине. Уобичајене методе пуцања укључују ултразвучну фрагментацију, хомогенизацију под високим-притиском, хемијско пуцање итд. Узимајући ултразвучну фрагментацију као пример, кораци су следећи:
Сакупљање бактерија: Центрифугирајте бактеријски раствор изазване експресијом да бисте сакупили бактеријске ћелије и ресуспендујте их у пуферу за лизу (као што је ПБС или Трис ХЦл пуфер).
Ултразвучна фрагментација: Бактеријска суспензија се ставља у ледено купатило и дроби помоћу ултразвучног дисруптора, обично користећи краткорочну{0}}методу вишеструке фрагментације (као што је сваки пут 10 секунди, интервал од 10 секунди, понавља се 10 пута) да би се избегла денатурација протеина услед прегревања.
Центрифугално одвајање: Центрифугирајте здробљену бактеријску суспензију да бисте одвојили супернатант и преципитат. Супернатант садржи растворљиве протеине, док талог може садржати инклузиона тела или ћелијске остатке.
Афинитетна хроматографија
Због чињенице да рекомбинантни ИГФ-1 ЛР3 типично носи Хис ознаку, може се пречистити коришћењем афинитетне хроматографије са јонима никла (Ни НТА).
Припрема колоне: Убаците Ни НТА паковање у колону за хроматографију и уравнотежите га пуфером за еквилибрацију (као што је ПБС који садржи 20 мМ имидазола).
Пуњење узорка: Убаците супернатант бактеријског лизата на колону за хроматографију, омогућавајући ИГФ-1 ЛР3 са Хис ознаком да се веже са јонима никла.
Испирање: Исперите колону за хроматографију пуфером за испирање (као што је ПБС који садржи 50 мМ имидазола) да бисте уклонили невезане или слабо везане протеине нечистоће.
Елуирање: Користите пуфер за елуирање (као што је ПБС који садржи 250 мМ имидазола) да елуирате ИГФ-1 ЛР3 везан за хроматографску колону и сакупите елуент.
Десалинизација и концентрација
Раствор ИГФ-1 ЛР3 након елуирања садржи високу концентрацију имидазола, који треба уклонити десалинизацијом и корацима концентрације да би се повећала концентрација протеина.
Десалинизација: Користите колону за десалинизацију или врећу за дијализу да уклоните имидазол из елуента и замените га одговарајућим пуферским раствором (као што је ПБС).
Концентрација: Концентришите десалинизовани раствор протеина користећи ултрафилтрационе цеви или центрифугалне концентраторе да бисте повећали концентрацију протеина до жељеног нивоа.
Испитивање чистоће и активности
Чистоћа и активност пречишћеног ИГФ-1 ЛР3 детектовани су СДС-ПАГЕ, ХПЛЦ или ЕЛИСА методама.
СДС-ПАГЕ: Анализирајте чистоћу пречишћеног протеина и потврдите да нема очигледних трака нечистоћа.
ХПЛЦ: Користите ХПЛЦ реверзне фазе или ХПЛЦ са искључењем величине за даљу анализу чистоће и дистрибуције молекулске тежине протеина.
ЕЛИСА: Ензимски имуносорбентни тест (ЕЛИСА) се користи за откривање биолошке активности ИГФ-1 ЛР3, а ниво његове активности се огледа у степену везивања за специфична антитела.
Процес сушења замрзавањем
Принцип сушења замрзавањем
Лиофилизација је техника сушења која уклања влагу кроз ниско{0}}замрзавање и сублимацију под вакуумом. Процес сушења замрзавањем{2}} обухвата три фазе: претходно замрзавање, сублимационо сушење и десорпционо сушење, што може максимизирати активност и стабилност протеина.
Кораци сушења замрзавањем
Пречишћени раствор ИГФ-1 ЛР3 поделите у боце за сушење замрзавањем или боце пеницилина и ставите их у сушач за сушење замрзавањем да се претходно замрзну испод -40 степени да би се раствор потпуно замрзнуо.
Постепено повећавајте температуру на око -20 степени у условима вакуума, омогућавајући леду да се сублимира директно у водену пару и уклони већину влаге. У овој фази, потребно је контролисати брзину загревања и степен вакуума како би се избегла денатурација или колапс протеина.
Даље подигните температуру на 20-30 степени да бисте уклонили преосталу влагу и смањили садржај влаге у производу осушеном смрзавањем на испод 1%. У овој фази потребно је одржавати висок степен вакуума како би се осигурало потпуно уклањање влаге.
Када се сушење заврши, брзо затворите{0}}боцу за сушење замрзавањем или боцу пеницилина да спречите поновни улазак влаге.
Заштита од сушења смрзавањем
Да би се заштитила активност и стабилност ИГФ-1 ЛР3 током сушења замрзавањем-обично је потребно додати средства за заштиту{5}}за замрзавање. Уобичајена средства за заштиту од сушења смрзавањем укључују:
- Угљени хидрати: као што су алгинат, сахароза, глукоза, итд., могу да формирају стакласте структуре и стабилизују конформацију протеина.
- Полимери као што су полиетилен гликол (ПЕГ) и поливинилпиролидон (ПВП) могу повећати вискозитет раствора и смањити агрегацију протеина.
- Амино киселине, као што су глицин и аланин, могу деловати као донори или акцептори водоничне везе, стабилизујући структуру протеина.
- Сурфактанти као што су Твеен 20, Твеен 80, итд. могу смањити адсорпцију протеина на зидове контејнера и побољшати стопе опоравка.
Узимајући трехалозу као пример, њена додана количина је обично 1-10 пута већа од масе протеина, који може да формира заштитни слој током сушења замрзавањем како би спречио денатурацију протеина.
Оптимизација процеса сушења замрзавањем
Оптимизација процеса{0}}леофилизације је кључна за побољшање квалитетаИГФ-1 ЛР3 лиофилизован. Подешавањем параметара као што су температура пре замрзавања, температура сублимационог сушења, аналитичка температура сушења и степен вакуума, може се постићи најбољи ефекат-сушења замрзавањем.
Температура пре смрзавања
Температура пре замрзавања треба да буде нижа од еутектичке тачке протеина да би се обезбедило потпуно замрзавање раствора. Обично се бирају температуре испод -40 степени.
Температура сушења сублимацијом
Температура сушења сублимацијом треба да буде нижа од температуре колапса протеина да би се избегла денатурација протеина или колапс контејнера. Обично се бира око -20 степени.
Анализа температуре сушења
Температура сушења анализе треба да буде виша од температуре сушења сублимацијом да би се уклонила заостала влага. Обично се бира 20-30 степени.
Степен вакуума
Степен вакуума треба одржавати на ниском нивоу (нпр<100 mTorr) to promote the sublimation and removal of moisture.
Popularne oznake: игф-1 лр3 лиофилизовани, Кина игф-1 лр3 лиофилизовани произвођачи, добављачи
